本发明公开了一种从菊苣中提取山莴苣类苦味素的方法，包括如下步骤：将菊苣根粉碎后，用水进行浸提，过滤后减压浓缩得总浸膏；将总浸膏分散于水中，利用乙酸乙酯萃取，经减压蒸馏后得到乙酸乙酯浸膏；将步骤二中获得的乙酸乙酯浸膏溶解后梯度洗脱分离，梯度洗脱中流动相A为乙酸乙酯，流动相B为甲酸，流动相C为正丁醇，洗脱条件为：0‑4min，45％A、50％B、5％C；4‑10min，45‑40％A、50‑55％B、5％C；10‑14min，40‑30％A、55％B、5‑15％C；14‑20min，30％A、55％B、15％C。本发明中提供的提取方法简便可行，且分离获得的山莴苣素和山莴苣苦素的纯度均大于98.0。
